Part 01 引言

在生物制品纯化工艺平台中，除病毒过滤基于其尺寸排阻的机理，被认为是最有效且最稳健的病毒清除步骤。ICH《Q5A（R2）：来源于人或动物细胞系生物技术产品的病毒安全性评价》指出：病毒过滤的作用机理主要是通过尺寸排阻去除病毒，是一种基于大小的分离方法。一般而言，产品中间体的体积通量以及冲洗过滤器的缓冲液的体积通量和压力（包括压力/流量中断）是病毒过滤的潜在关键参数。除病毒过滤基于尺寸排阻机理，理论上小型病毒通过除病毒过滤器的风险比大型病毒高。因此细小病毒（18-24nm）截留率通常作为病毒截留的最差条件进行考察。

本文旨在展示365英国上市集团Viruclear™ VF系列（聚醚砜材质）除病毒过滤器在高压、低压以及常规过滤压力和中断暂停条件下的病毒截留水平，考察365英国上市集团除病毒过滤器病毒截留的稳健性，并给出生物制药客户使用365英国上市集团除病毒滤器进行工艺开发和病毒清除挑战研究阶段的过滤参数设置及除病毒验证时的建议。

Part 02 案例分享

案例一：

使用针头过滤器VF Plus（catalog number：VFPESDCN1P）研究高压和低压条件下的MVM（鼠细小病毒）病毒去除效果。同时设定压力中断为最差条件。选取两种抗体物料，分别为12g/L的mAb1溶液和1g/L的mAb2溶液，MVM上游总添加量为7.2log PFU。使用噬斑法检测原液和滤液中的MVM滴度，计算病毒去除LRV。

注：实验压力设置为10psi，30psi，60psi。过滤目标载量均为1500L/m²，过滤达载量终点时，泄压使压力降为0并执行30分钟工艺暂停，然后恢复至前序压力，使用缓冲液顶洗20L/m²。

实验方案如图1所示，实验结果如下表所示。

结论：

噬斑法的LRV检测结果显示在低压／推荐压力／高压条件下MVM检出值均降低至低于定量限，体现了过滤器在三种压力条件和工艺暂停条件下的稳健的病毒去除能力。

案例二：

使用针头过滤器VF Plus（catalog number：VFPMPDSN1P）研究高压和低压条件下的MVM（鼠细小病毒）病毒去除效果。过滤物料为10g/L的mAb3溶液，MVM上游总添加量为7.2log PFU。使用噬斑法检测原液和滤液中的MVM滴度，计算病毒去除LRV。

注：实验压力设置为10psi，30psi，60psi。过滤目标体积均为100mL，三组实验中，过滤结束后均使用缓冲液顶洗60L/m²（15mL）和200L/m²（50mL）。

实验方案如图2所示，实验结果如下表所示。

结论：

噬斑法的LRV检测结果显示在低压/推荐压力/高压和较高的顶洗体积条件下，检出值均降低至低于定量限。体现了过滤器在三种压力条件和较高的顶洗体积条件下的稳健的病毒去除能力。

Part 03 总结

综上所述，在不同压力条件下，Viruclear™ VF 系列除病毒滤器对细小病毒均表现出稳健的截留能力。病毒清除验证研究是模拟实际放大生产工艺操作参数的缩小模型，重点考察在实际生产的参数条件下过滤器对病毒的去除水平。结合国内外法规或指南文件的核心思想，即验证实际生产工艺对病毒的清除效果，我们建议：

(1)生产工艺标准操作规程（SOP）规定稳定可操控的生产工艺压力范围。

(2)制定与实际生产相匹配的缩小模型。

(3)验证压力通常推荐采用实际生产中的控制压力，在设计VC验证方案时将过滤压力设置为SOP的上限压力，并在实验中设置至少一步压力中断（降至0psi）并持续一段时间，以考察极端低压的影响。通常至少在顶洗前中断一次，此时蛋白载量最大，病毒载量最大是所有最差情况的合集，验证通过还能为实际生产中预留处理特殊情况的时间。

(4)若条件允许，建议做一组MVM病毒在SOP规定的压力下限条件下的病毒截留能力的验证。

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Viruclear™ 系列除病毒滤器365英国上市集团指南